人胰岛素样生长因子结合蛋白1(Insulin-likegrowthfactor-bindingprotein-1,IGFBP-1)是一种分子量为25kDa的蛋白质,在人体内由胎儿或者人肝细胞和母体蜕膜合成并分泌。IGFBP-1是具有与胰岛素样生长因子(insulin-likegrowthfactor,IGF)高亲和力结合的蛋白,能够调节IGF的生物利用度,且具有调控细胞增殖分化的作用。怀孕之后,IGFBP-1的浓度开始升高,它是孕中期直到分娩前羊水中最主要的蛋白质之一。

临产前的胎膜破裂称为胎膜早破(Prematureruptureoffetalmembrane,PR0M),其发生率约为10%。胎膜早破是围生期最常见的并发症,可以对孕妇、胎儿和新生儿造成严重的不良后果。如可导致早产率升高,围生儿病死率增加,宫内感染率及产褥感染率升高。因此,胎膜早破的早期检测显得尤为重要,目前临床上胎膜早破检测的方法有镜检,pH试纸检测,早孕β-HCG试纸检测及HCG荧光偏振免疫测定(FPIA)法检测,但都存在敏感性不高,过程比较繁琐,而且特别容易受到尿液、精液、血液等的影响且发生胎膜破裂并一定会有显著的羊水泄露,导致准确度、灵敏度均不高。胎膜破裂时羊水中的IGFBP-1可通过破口流到宫颈阴道中,而IGFBP-1在羊水中的浓度比尿液及血液中的高100-1000倍,就算是很少的侧漏量也能被检测出来。所以IGFBP-1作为胎膜早破检测的灵敏性标志物。

 

人IGFBP-1单克隆抗体

科赛格最新推出的人IGFBP-1单克隆抗体CSB-DA286GmN①和CSB-DA286GmN②,以外购高质量试剂盒为标准,通过胶体金平台对自产抗体灵敏度和特异性方面进行反复验证,该抗体可以用于体外诊断试剂。

 

稀释线性

用生理盐水将IGFBP-1蛋白进行不同倍数的稀释,得到0、10、20、50、100、200、500ng/mL的校准品。以CSB-DA286GmN①作为标金抗体,CSB-DA286GmN②作为划膜抗体,建立IGFBP-1胶体金检测体系,最低检测限可低至20ng/mL。浓度20ng/ml时没有T线出现,当浓度≥20ng/ml时随着浓度的升高T线会逐渐加深,且在500ng/ml处没有出现带现象。

 

临床检测

收集3份健康孕妇的羊水(AF1-AF3),将其分别进行1:10、1:100、1:1000、1:2000、1:5000、1:10000不同倍数的稀释,同时收集3份没有怀孕妇女的阴道分泌物作为阴性对照样本(VS4-VS6)。用外购高质量的IGFBP-1试剂盒(A)和自产的

IGFBP-1胶体金试纸条(B)对这些样本进行检测,两种检测方法的cut-off值都在同一水平20ng/mL。从Table.1可以看出自产的IGFBP-1胶体金试纸条与外购的检测结果完全一致。

Table1.A和B的临床比对

“+”:阳性,“-”:阴性.“A”:外购比对试剂盒,“B”:科赛格IGFBP-1胶体金试纸条

 

特异性

A.尿液干扰

随机取三份人尿(U1-U3),用尿液配置0、10ng/mL人IGFBP-1阴性样本,检测结果都为阴性,说明尿液对检测结果没有影响不会造成假阳性。

B.孕妇血干扰

随机收集3份孕妇血样本(M1-M3),用阴性样本稀释液将这三份血分别进行1:1、1:10、1:100稀释。用自产IGFBP-1胶体金试纸条(B)和外购试剂盒(A)同时对孕妇血原液以及稀释后的样本进行测样分析,测样结果完全一致,说明自产抗体与外购试剂盒抗孕妇血的干扰能力一致。

Table2.A和B的特异性比对

“+”:阳性,“-”:阴性.“A”:外购比对试剂盒,“B”:科赛格IGFBP-1胶体金试纸条

 

稳定性

配制0、20、50、150ng/ml的IGFBP-1校准品,且将AF3羊水样本进行1:500、1:1000、1:2000稀释处理。将CSB-DA286GmN①和CSB-DA286GmN②同时37℃热破14天,热破处理后的抗体与-20℃和2-8℃储存的抗体在同一实验条件下去检测校准品和稀释处理的羊水样本,三个不同温度下处理的检测结果是一致的,说明抗体热稳定性较好。

Table3.抗体热稳定性

“+”:阳性,“++”:中阳,“+++”:强阳。“-”:阴性。

 

参考文献

1.Elizur,S.E.,Yinon,Y.,Epstein,G.S.,Seidman,D.S.,Schiff,E.,&Sivan,E.2005.Insulin-likegrowthfactorbindingprotein-1detectioninpretermlabor:Evaluationofabedsidetest.AmJPerinatol22,305-309.

2.Lee,SE,Han,B-D,Park,I-S,Romero,R,Yoon,BH(2008)Evidencesupportingproteolyticcleavageofinsulin-likegrowthfactorbindingprotein-1(IGFBP-1)proteininamnioticfluid.J.Perinat.Med.36(4):316-323

3.Lee,JH,Lee,SM,Oh,KJ,Park,C-W,Jun,JKandYoon,BH(2011)FragmentedFormsofInsulin-LikeGrowthFactorBindingProtein-1inAmnioticFluidofPatientsWithPretermLaborandIntactMembranes.Reprod.Sci.,18(9):842-849

4.Honkanen,H.,Rutanen,E.M.,&Heikinheimo,O.2004.Differentialkineticsofserumandcervicalinsulin-likegrowthfactor-bindingprotein-1duringmifepristone-misoprostol-inducedmedicalterminationofearlypregnancy.MolHumReprod10,65-70.